PCR

De la PCR en point final à la PCR quantitative en temps réel et à la RT-PCR, nous offrons un portefeuille complet de produits de haute qualité pour répondre à vos besoins d'amplification. Les produits pour la PCR en temps réel et en point final comportent l'ADN polymérase GoTaq® (Taq) dans des mélanges pratiques pré-établis pratiques, des kits et des formulations enzymatiques que vous pouvez optimiser pour la PCR de base, la PCR hot start, la longue PCR, la qPCR et la RT-qPCR.

Les gammes de produits pour la RT-PCR et la RT-qPCR en temps réel comprennent l'ADN polymérase GoTaq® et la rétrotranscriptase GoScript™, qui offrent des performances robustes et fiables en matière de transcription inverse et de PCR pour les matrices difficiles et en présence d'inhibiteurs de PCR.

Tous les systèmes, enzymes et réactifs PCR sont accompagnés de notre garantie de performance PCR. Si vous n'êtes pas entièrement satisfait d'un produit PCR Promega, nous vous enverrons un produit de remplacement ou vous rembourserons.

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PCR Basics

La PCR, la réaction de polymérisation en chaîne, est une technique de base qui a révolutionné la biologie moléculaire.  Dans cette technique, une molécule d'ADN cible est copiée plusieurs fois, ce qui permet une amplification exponentielle de la séquence d'ADN cible. 

Les composants clés d'une réaction d'amplification par PCR sont une ADN polymérase thermostable, des désoxynucléotides triphosphates (dNTP), un tampon de réaction et du magnésium, deux amorces oligonucléotidiques et un thermocycleur qui permet de faire la réaction par de multiples cycles de dénaturation de l'ADN, de liaison des amorces et d'extension de l'ADN à une température contrôlée.  

La transcription inverse suivie d’une PCR (RT-PCR) permet l'interrogation des séquences d'ARN. Dans la RT-PCR, une cible d'ARN est d'abord transcrite en ADN avant d'être amplifiée par PCR. 

La PCR en temps réel permet une analyse quantitative plus sensible d'un échantillon. Dans la qPCR et la RT-qPCR, les produits de réaction marqués sont détectés en temps réel au fur et à mesure de la réaction d'amplification. Les méthodes basées sur la qPCR sont un moyen standard pour quantifier les séquences d'ADN cibles ou pour surveiller l'expression des gènes.

Différentes polymérases d'ADN thermostables sont employées pour optimiser les réactions à des fins spécifiques. Par exemple, dans le démarrage à chaud de la PCR (HotStart), l'ADN polymérase ne devient pas active avant que la température de dénaturation soit atteinte. Cela réduit au minimum la formation de produits d'amplification non spécifiques et permet de travailler à température ambiante. L'une des méthodes les plus efficaces pour les réactions de démarrage à chaud peut être réalisée en utilisant une Taq polymérase bloquée par anticorps. 

La Longue PCR peut être réalisée en utilisant un mélange de polymérases thermostables, comme l'ADN polymérase Taq et une enzyme de correction dépourvue de l'activité exonucléase 3'-5', qui excise les bases incorrectement incorporées dans le brin d'ADN synthétisé. Cela permet une plus grande précision et la génération de séquences cibles plus longues. Les polymérases thermostables de haute fidélité telles que le Pfu ont un faible taux d'erreur et possèdent également une activité exonucléase de 3' à 5'.